熒光PCR凍干及蛋白質(zhì)類凍干保護劑

常用的凍干保護劑種類有多輕基化合物、糖、蛋白質(zhì)、聚合物、氨基酸、鹽、胺、表面活性劑等。蛋白質(zhì)類凍干保護劑可分為兩種 : 一種是蛋白質(zhì)藥物自身，另一種為外來蛋白質(zhì)。 一些蛋白質(zhì)經(jīng)凍融后的活性直接和蛋白質(zhì)的起始濃度有關 , 起始濃度升高有時會促進蛋白質(zhì)的復性一種常用的外來蛋白質(zhì)類保護劑為血清白蛋白 , 它是一個經(jīng)典 、優(yōu)良的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑 。 例如 , 冷凍時 , 1 % 牛血清白蛋白可使溶液的活性不受損失 ;人血清白蛋白則在更低濃度 ( 0 . 0 5 % 一 0. 1 % ) 時也能有效阻止蛋白質(zhì)表面的吸附，對凍干過程中多數(shù)蛋白都具有保護作用。當干燥蛋白質(zhì)藥物時保護劑緊密地包裹相鄰近的蛋白質(zhì)分子形成一種在結(jié)構(gòu)上與冰相似 的碳水化合物玻璃體,由于私度很高其擴散系數(shù)很低蛋白質(zhì)分子運動能力減某一蛋白質(zhì)的保護作用通常有一個好的使用濃度( 或使用量 ) , 故選擇保護劑時還要合理選擇使用量。在做溶液凍干時，溶液濃度高或低對制干燥過程中藥液表面首先品的影響。溶液濃度過高時：被干燥形成結(jié)構(gòu)致密的表層。該表層孔隙細小，透氣性差，里面的水分難以穿過表層，因而沿瓶壁上升，導致制品離壁、萎縮；此外，濃度過高時，藥液在干燥過程凍干中容易結(jié)塊，所得制品外觀不均勻。濃度過低時：機械強度低，在包裝及運輸過程后制品結(jié)構(gòu)比較疏松甚至變成粉末，影響制品的外觀。分享熒光PCR試劑凍干示例：(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護劑按照配方進行混合；（2）凍干保護劑，可選用：甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。（3）將上述混合液灌裝至PCR擴增管或者八聯(lián)管中。（4）進行凍干。（5）出倉進行測試。（6）配方修正。